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本試劑盒應用雙抗體夾心法。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入蛋白，再與HRP標記的蛋白抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人蛋白濃度。