隨著(zhù)免疫熒光技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光染料及其標記的抗體偶聯(lián)物也被廣泛的應用于生物學(xué)實(shí)驗中。目前，市場(chǎng)上抗體及蛋白標記的熒光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA);  Alexa Fluor?系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的為Alexa Fluor?系列和CFTM系列。

 

一、CFTM系列染料的核心對比Alexa Fluor?系列具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢：

 

1、新型羅丹明核心

羅丹明染料以?xún)?yōu)異的耐光性和良好的熒光量子產(chǎn)量著(zhù)稱(chēng)。因此很多Alexa Fluor?染料具有羅丹明核心結構，但是，傳統羅丹明的化學(xué)結構很難從長(cháng)波長(cháng)的熒光染料延伸至遠紅外區域甚至是更具挑戰性的近紅外區域，而且生物偶聯(lián)后其水溶性并不理想。Biotium 科學(xué)家發(fā)現從綠色到近紅外多色熒光的羅丹明染料的新型化學(xué)方法。該方法被有效的應用于CF染料的產(chǎn)品中，尤其是遠紅外CF染料，而且通過(guò)這種方法制備的染料不僅水溶性極佳而且耐光性極好。

 

2、特異性高的近紅外染料

近紅外染料最大的特點(diǎn)是比可見(jiàn)光范圍要大很多，大滴的染料常會(huì )導致染料水溶性低、染料聚合體多、熒光量子產(chǎn)量差等問(wèn)題。為了解決這些問(wèn)題，許多商用的近紅外染料比如AlexaFluor?、DyLight?dyes和IRDyes?近紅外染料，在制備時(shí)吸附了大量的帶負電荷的磺化基團，其磺化作用可以在一定程度上會(huì )提高染料的溶解性和熒光性，但這樣也帶來(lái)了另一些更加嚴重的問(wèn)題，經(jīng)這種染料標記的生物耦聯(lián)物的非特異性結合。Biotium的科學(xué)家用革命性的方法設計出近紅外染料CF，在避免引入大量負電荷的情況下，極大的保證了染料優(yōu)異的理化特性。Biotium 近紅外的CF 染料以花青或羅丹明染料為核心結構，該核心結構的特殊化學(xué)修飾限制了染料的分子內位移，從而獲得染料的高量子產(chǎn)率和更好的水溶性。因此，近紅外CF染料比其他近紅外染料熒光強度更高，光穩定性好。最重要的是，在免疫印跡實(shí)驗上應用近紅外CF染料標記蛋白質(zhì)樣品相對于其他商業(yè)用近紅外染料制備的抗體偶聯(lián)物，最大限度的提高了信噪比。

 

3、優(yōu)異的標記效率

生物偶聯(lián)后的活性染料一般很容易水解，會(huì )在運輸，操作及儲存中帶來(lái)諸多不便，最終致染料結合效率低下。像Alexa Fluor?dyes,DyLight?dyes and IRDyes?等嚴重的磺化作用有較強的吸濕性，惡化水解作用等問(wèn)題。所有Biotium的CF染料具有相對穩定的胺活性的SE基團型，這比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解?？傮w來(lái)說(shuō)，CF染料SE產(chǎn)品一貫的給出更高的標記效率，提供給用戶(hù)更好的使用價(jià)值。

 

二、選擇方案：

 

1、藍色（350-450nm處激發(fā)）

CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮藍和紫外光激發(fā)；

CF350是類(lèi)似于A(yíng)lexa Fluor 350和傳統熒光染料AMCA的藍色熒光染料，CF350的熒光強度高于A(yíng)lexa Fluor350、AMCA , 吸附在蛋白上的熒光超過(guò)50%, 水溶性更好, 耐光性非常優(yōu)秀亮, 更容易與現有的綠色熒光基團區分；

 CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405 ----近乎完美的匹配藍色二極管激光器；

 CF 405S/ CF 405 M 、Alexa Fluor 405與近來(lái)使用的熒光顯微鏡和流式細胞儀405nm;譜線(xiàn)的藍色二極管激光器完美的匹配。在流式細胞儀上的分析結果顯示CF 405S/ CF 405 M熒光信號強度高于A(yíng)lexa Fluor 405染料1.7倍。

 

2、綠色（488nm處激發(fā)）

CF 488A、Alexa Fluor 488、FITC、FAM、DyLight 488、Cy2等----針對488nm 氬離子激光器的綠色熒光染料；

以上染料其標記的抗體蛋白適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；流式細胞儀的FL1通道檢測；或者可用于熒光顯微鏡技術(shù)；

CF 488A最低限度的帶電量降低了與抗體耦聯(lián)物的非特異性結合；在紅色通道溢出少于A(yíng)lexa Fluor 488；耐光性好；水溶性好和pH 不敏感；良好的穩定性和活性染料的標記率。

Alexa Fluor 488在較寬的PH值范圍內保持穩定（PH4~10）；

FITC激發(fā)波長(cháng)488nm，最大發(fā)射波長(cháng)525nm；缺點(diǎn)熒光強度易受PH值影響，PH值降低時(shí)其熒光強度減弱。

 

3、橙紅色（543-555nm處激發(fā)）

CF 543、Alexa Fluor 546、ATTO550, Cy 3, DyLight 549, Rhodamine (TRITC) 匹配543nm的橙色熒光染料；

CF ?543 熒光條帶明亮，耐光，水溶性好，確保了CF 543染料與抗體的耦聯(lián)物保持優(yōu)異的水溶性，為該波段最亮的橙色熒光染料。例如：同等的標記程度下，CF 543標記的羊抗鼠IgG抗體的亮度高于用Alexa Fluor 546 標記的2~10倍。

CF 555、Alexa Fluor 555、Tetramethylrhodamine (TAMRA) 等匹配Cy3濾光片的橙色熒光染料；

 

4、紅色（568-594nm處激發(fā)）

CF 568、Alexa Fluor? 568, ATTO 565, Rhodamine Red等568nm處紅色熒光染料；

CF 568染料耐光性最好；高效水溶性；比Alexa Fluor 568 標記的抗體亮度更亮；

CF 594、Alexa Fluor? 594, ATTO? 594, DyLight? 594, Texas Red 等最亮紅色熒光染料；

CF594由于其高量子產(chǎn)量和優(yōu)異的水溶性而比AlexaFluor594 明亮2~4倍。同時(shí)CF594 對光極其穩定，使它能被理想地應用于諸如共聚焦顯微鏡和單分子顯像條件苛刻的應用中去。

 

5、遠紅外（620-660nm處激發(fā)）

CF 620R、LightCycler Red 640等620nm處；

CF ? 620R是以紅色熒光染料羅若丹（rhodamine）為基礎的遠紅外的熒光染料，該染料有高熒光亮度和極度的耐光性。它的吸收和發(fā)射光譜為617 和639nm，該染料能被用于熒光能量共振轉移中高能量的接收者，或者在激發(fā)和發(fā)射窗口能和該染料的光譜特性匹配的條件下，被應用于多色檢測中的最高熒光量采集。染料的卓越的水溶性有利于生物耦合在水介質(zhì)中，更好的保持耦聯(lián)物的生物特異性結合。

CF 633、Alexa Fluor 633, Alexa Fluor  647, Cy 5, DyLight 633, DyLight649等633/635nm 激光線(xiàn)的最佳染料熒光染料；

CF 633染料的優(yōu)點(diǎn)：當被633 nm 氦氖激光或635 nm 紅色二極管激光激發(fā)時(shí)，產(chǎn)生最亮的抗體耦聯(lián)物；光穩定性遠高于A(yíng)lexaFluor 647；高效的水溶性

CF 640、Alexa Fluor 647, ATTO 647N, Cy5, DyLight649等遠紅外熒光染料；

CF640R 的優(yōu)點(diǎn)：以紅色染料羅丹明（rhodamine）為基礎，吸收和發(fā)射峰類(lèi)似Cy5、Alexa Fluor647；但以羅丹明（rhodamine）為基礎的紅色染料CF 640R它最大的優(yōu)點(diǎn)就是對光穩定性，Cy5 和 Alexa Fluor 647以花青素為基礎，因此有著(zhù)和花青素一樣的特點(diǎn)即耐光性較差。極好的亮度和耐光性使CF ? 640R 被理想的用于共聚焦顯微鏡和單分子成像等條件苛刻的檢測中。

 CF 647、Alexa Fluor 647, ATTO 647N, DyLight649等遠紅外熒光染料；

以花青素為基礎的遠紅外熒光染料CF 647 比Cy 5、Alexa Fluor 647 明亮。

 CF 660、Alexa Fluor? 660, Allophycocyanin (APC)等介于遠紅外近紅外之間的熒光染料；

 

6、近紅外（680-790nm處激發(fā)）

CF 680R/ 680、Alexa Fluor 680, Cy 5.5, IR Dye 680等近紅外熒光染料；

CF680 是高水溶性的以花青素為基礎的染料，分子量大約為3000。該染料標記抗體極佳，發(fā)出最亮的熒光和在免疫染色光譜相似的染料中產(chǎn)生最高的信噪比。

CF 680R 分子量約為900，更適合標記核酸或者相對小的生物分子。CF680R 是新型的以羅丹明（rhodamine）為基礎的高熒光亮度, 極度耐光性染料，這使它可被理想地用于共聚焦顯微鏡，單分子成像等條件要求苛刻的應用中。

CF 750、CF?770 and CF?790等近紅外熒光染料；

CF750、CF770、CF790是領(lǐng)域內真正具有突破性的長(cháng)波長(cháng)的新型染料代表。其他近紅外染由于受到染料聚集和穩定性差等因素的影響而導致熒光亮度有限?；贐iotium科學(xué)家研制的新型分子工程技術(shù)，近紅外CF 染料克服了這些問(wèn)題。即使在633 nm 被激發(fā)，CF750 也會(huì )比APC-AlexaFluor 750擁有足夠的亮度來(lái)在流式細胞儀檢測中帶來(lái)更好的信噪比，而且不存在串聯(lián)染料的低穩定性等問(wèn)題。另外，近紅外CF 染料高度水溶性，沒(méi)有會(huì )增加抗體耦聯(lián)物非特異性結合的過(guò)剩的負電荷，也代表了該產(chǎn)品的優(yōu)秀性能。